1凱氏定氮儀的工作原理和結構
凱氏定氮儀是根據凱氏定氮法設計的儀器,主要用于測定混合物和化合物中的總氮含量。在現有的催化劑條件下,使用液體標準即可完成測定,通過計算耗酸量即可計算出樣品中的氮含量。因為蛋白質中氮含量系數的計算是相對恒定的,所以用氮含量乘以換算系數就可以得到蛋白質的總含量,這是蛋白質定量測定的經典方法。
1.1消化
(見圖1)作為更傳統的凱氏消化和蒸餾裝置。通過在燒瓶中混合和添加樣品,證明樣品可以被滲透。置于燒瓶中預熱至420℃消解裝置中,直至燒瓶中的消解液呈透明清澈的藍綠色,繼續加熱0.5-1小時,轉化樣品中存在的有機氮,直至生成無機氮-銨[3]。
1.2蒸餾
把消化液取下來,放涼。加入50毫升水中后,稱取50毫升加入接收瓶中,然后加入混合指示劑。蒸餾裝置連接后,將5mL的過量溶液加入消化瓶中,可中和成為所需用途,然后開始蒸餾過程。將消化液中的銨銀轉化為氮餾出物,可被過量吸收[4]。
1.3滴定和計算
用酸性標準溶液滴定洗手液至終點,洗手液中氮和蛋白質含量的計算公式如下[5]:
其中:氮含量用n表示;滴定樣品所需的標準酸溶液的體積用V1表示;滴定空白所需的標準酸溶液用V0表示;校準時的溶液濃度用c表示;樣品的質量用m表示;樣品消化液的總體積用v表示;樣品中消化液蒸餾所需的體積用v表示。
計算后,將氮含量乘以不同樣品類型對應的氮換算成的蛋白質系數,即可得到蛋白質含量。