在細胞培養技術中，細胞計數是一項基本技能，對于規范培養條件和需要量化的實驗至關重要。本文介紹了用血細胞計數器計數細胞的經典方法和一些需要注意的細節。

　　細胞懸液的制備:

　　對于貼壁細胞，我們需要用胰蛋白酶消化，使細胞從培養皿表面脫落。

　　根據需要，加入適當體積的培養基來中和和稀釋細胞，以獲得均質的細胞懸液。要求盡量吹凈細胞，不要留下任何細胞團。

　　準備血細胞計數器:

　　用70%乙醇清潔蓋玻片和血細胞計數器。

　　將蓋玻片弄濕(用水或呼吸，使蓋玻片與血細胞計數器接觸更緊密，更容易粘在一起)，蓋在血細胞計數器上。

　　臺盼藍染色(可選):

　　如果有必要計算細胞活力，則有必要將細胞懸液與等體積的0.4%臺盼藍混合。

　　室溫孵育3-5分鐘，使臺盼藍進入死細胞，使死細胞呈藍色。

　　血細胞計數器加載:

　　用移液管將細胞懸液或細胞/臺盼藍混合溶液滴到血細胞計數器的計數池邊緣。此時，液滴會在虹吸作用下進入蓋玻片下的計數池。

　　同樣，細胞懸浮液也被添加到另一側的計數池中。

　　將計數板放置幾分鐘，使細胞散開，同時用吸水紙吸收多余的液體。

　　細胞計數:

　　在100倍的顯微鏡下，移動計數板將視場對準計數板的中央大正方形，四周是一圈三條平行線，中間是密密麻麻的網格。中央的正方形區域幾乎可以填滿整個視野。

　　用手持計數器記錄計數池四個角和中央方格的細胞數(位置1-5，經典電流-協議建議每個方格的細胞數不大于20-50)，重復記錄另一側計數池的細胞數，共計十個方格。計數方法是只計數被上下兩條線壓住的細胞，不計數被上下兩條線壓住的細胞(如下圖所示，總的原則是“數而不數，數左而不數右”，判斷標準是是否觸及三條邊線的中線)。如果有多個單元格未被吹成一組，則只能記錄為一個單元格。如果有很多腫塊，可能需要重新吹甚至消化，直到大部分細胞都是單細胞。