微生物限度檢查法(薄膜過濾法)
驗證方案
微生物限度檢查法(薄膜過濾法)驗證方案
代碼:表
一、核查方案的起草和批準
1.驗證方案草案
起草人:起草期:年月日
2.驗證團隊成員:
3.驗證方案審計
4.驗證方案批準
批準人:批準日期:
二、驗證方案
1.驗證的目的和原則
1.1驗證目的
為了確認所采用的方法適用于該藥品中細菌、霉菌和酵母菌的測定，特制定本方案。驗證過程應嚴格按照本方案規定的內容進行，因特殊原因確需變更的，應報驗證委員會批準。
1.2原則
通過比較四組試驗菌的恢復生長結果，評價整個試驗方法的準確性、有效性和重現性。
2.驗證方法步驟
2.1驗證前的準備:微生物限度檢查法(薄膜過濾法)驗證前，應對所有平板和稀釋劑進行嚴格檢查。
按照相關滅菌程序進行消毒，確保不影響檢測結果。測試細菌應包括G-、G+、酵母和霉菌微生物，以基本覆蓋樣品中可能存在的微生物。
2.2驗證試驗操作方案:用不同批次產品的三種微生物限度檢查方法進行平行試驗，通過計算回收率判斷限度檢查方法是否對產品有影響。
2.3試驗結果的可接受標準:用標準菌株評價法的微生物限度檢查樣品中微生物的抑制情況，試驗結果應顯示稀釋液對照組的細菌回收率不低于70%，試驗組的回收率不低于70%。
3.測試實現
3.1試驗前的準備
3.1.1主要儀器設備:生化培養箱、電子天平、高壓蒸汽滅菌器、凈化工作臺。
3.1.2操作環境:手術室應安裝空氣除菌過濾層裝置。環境潔凈度不低于10000，局部潔凈度100(或把凈化工作臺放在同一水平)。操作室或凈化工作臺的潔凈空氣應保持對環境的正壓，不低于4.9pa
3.1.3試樣:
批號:批號:批號:
3.1.4培養基:
3.1.5稀釋劑:PH7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液
上述材料經115℃高壓蒸汽滅菌30分鐘。
3.1.6用于驗證的微生物的名稱和編號。
實驗菌株來源:
序列號由細菌名稱、傳代次數和制備日期的首字母組成。
3.1.7儀器:無菌濾膜:(孔徑0.45um直徑50mm)，無菌移液管(5ml)。
4.驗證方法
4.1菌液的制備
大腸桿菌、枯草芽孢桿菌接種于10ml無菌營養肉湯中，于30～35℃培養18～24h。將白色念珠菌接種于改良馬丁液體培養基中，于23 ~ 28℃培養24 ~ 48。將黑曲霉接種于改良馬丁液體培養基中，于23 ~ 28℃培養5 ~ 7天。用0.9%無菌氯化鈉溶液將上述培養物制成每毫升含50 ~ 100個fu菌落的菌懸液。
4.2實驗方法
試液的制備:取10g(ml)樣品，加入100ml ph 7.0的無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，搖勻使其分散均勻□,用均質機混勻□,置于45℃水浴中使外殼熔化并混勻□,制成1: 10的均勻試液。
樣本測試組
取10ml 1:10試液(相當于1g或1ml試液)，加入100ml稀釋液中，混勻，過濾，用稀釋液沖洗濾膜3次，每次100ml，在*后的沖洗液中加入50~100cfu菌液，過濾后，取出帶菌濾膜，菌面朝上(與細菌和樣品接觸的面)貼在固化的培養基上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養瓊脂培養基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養基平板上。
b菌液群
將上述菌液各1ml加入100ml稀釋液中，混勻，過濾，用稀釋液沖洗濾膜三次，每次100ml。過濾后，取出帶有細菌的濾膜，細菌面朝上(接觸細菌和樣品的一面)貼在固化的培養基上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養瓊脂培養基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養基平板上。
c測試樣品對照組
取上述1: 10試液10ml，加入100ml稀釋液中，混勻，過濾，用稀釋液沖洗濾膜3次，每次100ml，過濾后取出濾膜，貼在已凝固的培養基上，接觸樣品的面朝上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養瓊脂培養基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養基平板上。
d稀釋劑對照組
用PH7.0的氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液沖洗濾膜三次，每次100ml，最后一次沖洗液中加入50~100cfu菌液，過濾后取出帶菌濾膜，將菌面貼在固化的培養基上。將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌附著在營養瓊脂培養基平板上；白色念珠菌和黑曲霉附著在玫瑰鈉瓊脂培養基平板上。
4.3文化
大腸桿菌、枯草芽孢桿菌在30 ~ 35℃培養48h，白色念珠菌和黑曲霉在23 ~ 28℃培養72h，計數菌落數。
5.試驗結果
5.1產品試驗組微生物生長檢查:批號:
5.2對照組微生物生長檢查:批號:
5.3稀釋液對照組微生物生長檢查:批號:
5.4菌液組微生物生長檢查:批號:
6.回收率的計算
6.1稀釋液對照組細菌回收率
表中:回收率=稀釋液對照組平均菌落數÷菌液組平均菌落數×100%。
6.2試驗組細菌回收率
表中:菌液組回收率=(試驗組平均菌落數-試驗對照組平均菌落數)×100%。
7.結論:
7.1經驗證，大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌和黑曲霉的回收率分別為%、%、%、%和%。
7.2稀釋劑的回收率為%、%、%、%。
上述驗證結果證明本品采用上述方法進行微生物限度檢查。
檢查員:檢查者:
8.驗證結果的評估和分析
質量控制部負責記錄驗證和試驗結果，驗證小組對驗證和試驗結果進行評價，起草驗證報告并提交給驗證委員會。
驗證委員會負責對驗證結果進行綜合評估，做出驗證結論，并簽發驗證證書。驗證結果的評審應包括:
(1)核實測試中是否有遺漏；
(2)驗證方案在驗證實施過程中是否被修改，修改的原因和依據，是否得到批準；
(3)核實記錄是否完整；
(4)驗證試驗結果是否符合標準要求，偏差及對偏差的說明是否合理，是否需要進一步補充試驗。
9.*最終批準
驗證報告經驗證組長審核后，提交驗證總負責人批準，并簽發驗證證書。
驗證報告
年至年，驗證組根據驗證組批準的驗證文件，對微生物限度檢查法(薄膜過濾法)進行了一系列驗證工作，取得了預期的結果?，F將有關事項說明如下:
1.驗證方案在實施過程中未被修改。
2.驗證方案的性能指標在驗證過程中沒有發生變化，誤差在允許范圍內。
3.驗證過程中的結果符合規定的要求，記錄完整、真實。
4.驗證結果符合設計要求和GMP原則，可以投入使用。
5.當成分或檢驗條件發生變化時，需要重新驗證。
以上情況，請你委批準核實！