實驗室人員是檢測工作的主力軍。既要保證檢測結果的有效性，又要時刻面臨感染的風險。摘要:本文從生理特性、熒光PCR原理、PCR實驗室準備規范、樣本檢測操作、實驗室數據分析和常見問題分析等方面闡述了“PCR實驗室檢測注意事項”。

　　1、傳染源

　　目前傳染源主要是感染病人。無癥狀感染者也可能成為傳染源。

　　2.傳輸路由

　　通過呼吸道飛沫和密切接觸傳播是主要傳播途徑。在相對封閉的環境中長期接觸高濃度氣溶膠的情況下，有可能通過氣溶膠傳播。由于可在糞便和尿液中分離，應注意糞便和尿液對環境的污染造成的氣溶膠或接觸傳播。

　　3.熒光PCR原理

　　重復變性-退火-延伸這三個過程，模板DNA的量會成倍增加。理論上n次循環后，模板量會達到2的n次方。

4.常見問題分析

　　(1)試劑已經翹了，如何處理？

　　答:如果是單信道，無論是FAM還是VIC信道，都要按要求復檢。如果不方便重新取樣，建議重新提取原樣品進行驗證。如果復檢是陰性，如果復檢還是同一個渠道，就要仔細復查結果。首先，必須消除實驗室污染。二是要了解清楚患者信息，查看臨床癥狀和接觸史。如果無法確認，建議重新采樣。如果出現大量弱陽性擴增尾，首要原因是考慮實驗室污染，可以通過做環境樣本和陰性對照來驗證和排除。

　　②N基因和1ab基因是地方性的嗎？哪個更敏感？會和其他剪輯重疊嗎？

　　答:N基因和1ab都是特異性的，不會與其他呼吸道病原體發生交叉反應。設計的時候，兩個基因的序列不一樣，導致敏感度不一樣。N基因的敏感性高于1ab。

　　③檢驗結果與臨床診斷不符。如何解讀它們？

　　答:因為是RNA病毒，所以很容易降解。此外，測試結果還與取樣、提取和樣品本身的濃度有關。需要逐一分析，結合臨床癥狀才能解讀。

　　④以生理鹽水為陰性對照，內標也會升高。這怎么解釋？

　　答:由于試劑是內源性內標，而內源性內標標記了一種人源基因，存在于人的表皮細胞中，操作過程中可能出現人源污染，環境污染也可能導致內標升高，這也是上面提到的環境樣本質控的建議。

　　⑤樣品內部沒有標注怎么辦？

　　答:如果沒有找到樣品的內標，必須對樣品進行復驗，樣品可以重新混合。如果重新抽取后仍未找到樣品的內標，則在排除抽取問題的情況下，采樣不合格，應通知臨床重新采樣進行復檢。

　　⑥收集環境樣本檢測類病毒。為什么大部分樣本不能內部標記，偶爾個別樣本可以內部標記？

　　答:因為試劑檢測的是人體內源性內標，環境樣本一般不含人體細胞，所以無法檢測到內標；偶爾會檢測到內標，這可能是由于人源細胞粘附在環境樣品上。