分配色譜法
這種色譜的流動相和固定相都是液體,樣品分子在兩個液相之間很快達到平衡分布。這種分離類似于萃取過程,是利用各組分在兩相中分配系數的差異來實現的。
常用的固定劑有β,β’-雙氧(ODPN)、聚乙二醇(PEG400~4000)、三亞甲基二醇(TMG)和角鯊烷(SQ)。使用與氣相色譜相同的方法,將固定液涂在多孔載體表面,但在使用中容易流失。目前,鍵合固定相被廣泛應用。在這種固相中,固定液沒有涂覆在載體的表面上,而是通過化學反應將有機基團結合到純硅膠顆粒的表面上。
例如,可以通過氯十八烷基硅烷和硅膠表面上的羥基(-OH)之間的反應形成烷基化表面。這種固定液的優點是不容易被流動相侵蝕。在分配色譜中,流動相可以是純溶劑,也可以用混合溶劑進行梯度洗脫,其極性應與固定液不同,以避免兩者之間的相容性。
液相色譜所用的基本理論:塔盤理論和速率方程與氣相色譜基本相同,但由于氣相色譜是用液體代替氣體作為流動相,所以液體和氣體的性質是不同的。
液相色譜中使用的保留值、塔板數、塔板高度、分離度和選擇性等基本概念與氣相色譜中使用的基本概念一致。
高效液相色譜儀的構建
高效液相色譜系統主要由流動相儲液瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成。其整體組成與氣相色譜相似,但根據流動相為液體的特點做了很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定穩定,采樣系統要求采樣方便,切換嚴格。同時,由于液體流動相的粘度遠高于氣體,為了降低柱壓,HPLC的色譜柱一般較粗,長度也遠小于氣相色譜柱。